最近在做发根农杆菌转染实验，很不幸每次转过去的材料都被污染了，先不说客观原因，关于超净工作台上的无菌操作，有几个问题，请专业人士回答，切勿误人子弟！！ 但是其他组的转化是正常的，从其他组拿来的材料，经过我们一转又被污染了。想了好几天找不到原因，老师只是说态度不够认真。
1、带菌的手表和袖子伸入无菌区，会不会造成污染？
2、镊子和刀片带菌的部分放置在了无菌纸上，会不会造成交叉污染
3、解开灭过菌的带有塑料膜的锥形瓶上的绳子之后，手用不用再次消毒？
*4、镊子和手术刀的刀柄部分要用75%酒精消毒，不要直接放在操作台或者无菌滤纸上，要放在无菌的容器中？
5、灭过菌的锥形瓶、培养皿拿到超净工作台上，外壁用不用酒精擦拭灭菌？
6、灼烧过的接种环、镊子、刀片分别在多长时间之后能冷却到室温，以避免对材料的损伤？
7、废液缸是否应该放置在超净工作台最靠外沿的地方，因为风机吹出来的风都是无菌的？
8、枪头盒使用完之后有没有必要立即盖上，局部环境都是无菌的，感觉没有必要？
和你的专业不一样，不过也用超净台
1、实验室工作时是不能戴手表的，甚至项链、戒指、耳环等在工作期间应取下，否则会带来安全隐患。而袖子根本不应该伸入到生物安全柜里呀，起码你要穿上洁净工作服吧？事实上只要你的手伸进去就会在一定程度上影响到了气流，即可能造成污染，因此要小心操作，缓慢谨慎，切不突然可有太大动作。
2、当然会，染菌部分对无菌部分污染。
3、这个不好说，似乎没有说这时候一定要消毒的，不过你严格的话就消一消吧，不过我是不消的，因为太麻烦了，时间的延长和操作的烦琐其实也对实验不好。
4、镊子和手术刀应该放在容器中灭菌后使用，而不是用75%酒精消毒，使用过程中手只可接触柄部，使用完后就不能重复使用了，下一次操作应换一个镊子或手术刀。
5、灭菌过程应该用容器装好灭菌，灭菌后连容器一起拿到实验室再把这些东西拿出来放在超净台中，外壁不用擦。
6、这个要靠自己的感觉了，接种环大约20秒，可以在未接种的部位碰一下冷却，这样就不用等了。镊子和刀片你是用灼烧的？应该用灭菌好的一次性使用。
7、这个应该更照顾你的操作，放在你的右手易及之处。
8、无菌操作就体现在这些细微的环节上，你不盖或许在绝大多数情况下无影响，但是绝绝对对的无菌条件是不可能保证的，说不定1000个样品中就有1个被污染了呢？
参考知识1
1.不会
2.不会
3.不用
4.都可以
5.不用
6.如果怕损伤，你可以将灼烧过的镊子等，放在75%酒精中蘸一下，即可。
7.可以
8.最好立即盖上
根据你的问题，我怀疑是你的农杆菌本身出了问题，纯化一下试试。追问