怎么切好冰冻切片？

2023-01-08

本文主要是 怎么切好冰冻切片？ 相关的知识问答，如果你也了解，请帮忙补充。

冰冻组织的取材，就是选择好合适的组织块，放在一个小的金属托上进行速冻，冻到一定的硬度后，就在病理切片机进行切片。然后将切片放入酒精或者专有的固定液里固定，最后进行相应的染色及封片。再盖上盖玻片，贴上病理号标签，这样一张冰冻切片就制作完成了。 参考知识1 冰冻切片技术

1.从锋利的刀片开始

我发现使用新的锋利的刀片时常常做出高质量的片子。我觉得在医疗场合中某些尽量省钱的做法显得有些因小失大。一般我对每位患者的标本都使用一组新的刀片，当片子的质量开始下降时，我会立刻更换刀片。某些组织如质地较硬的胶原和钙化组织会使刀片很快变钝，因此，经常更换刀片显得很有必要，有时候我在切片过程中要连续更换2-3次刀片。

2.坐着还是站着

我切片时总是坐在一张凳子上。要学会把刷子作为一种便捷的辅助工具来操作，从而精细地控制显微厚薄程度的片子。切片时俯身弯腰，颈部过伸的姿势有些不妥，要尽量处于放松和舒适的姿势以便能最大程度控制你的左手。

3.刷子

我是一位刷子的使用者。我相信要想切好片子首先学会使用刷子。刷子的作用就在于粘住片子并把片子弄到台子上。冷冻的片子会自发的卷缩并从刷子上脱离下来，因此，我使用一把有硬毛、夹取面宽的刷子。我发现来自中国的野猪毛十分坚硬，非常管用。你可以花3美元从工艺店买一把1/4英寸长的#2号扁平无色的刷子，把毛削成一个角度。由于是个有角的头端，加上握持刷子成一定的角度，这样刷子与组织接触时就会象扫帚一样的平。我不能理解为什么有人使用脆弱的骆驼毛刷子，组织片很容易从这些柔软的毛上掉下来。

4.握持刷子

左手象拿笔一样握持刷子，将第五指轻压于台面上以稳定握笔的手(或根据手和切片机尺寸的大小置于你感觉合适的地方)，这样可以保证操作者动作的灵活及可控性。我把刷子削成一个角度，大致与左手握持刷子的角度相同，这样使刷子平着接触组织的1/4。

5.摇柄的旋转

以连续均匀的力量转动切片机的摇柄，且要毫不犹豫。我看到很多冰冻切片者手握着刷子在开始切片时总要停一下，缓慢的抓取组织，然后再开始转动摇柄。依我的经验看来，这种动作增加了起始切片假象的可能，会使片子的厚度不均匀，也增加了处理脂肪类组织的难度。我切片时，象前面所说的那样手握刷子，以一种连续的动作抓取组织，这个动作与刀片接触组织同时开始并贯穿于整个过程。

6.刷子的移动

组织块移向刀片时刷子也要同步地向下移动，当组织块刚好接触刀片时刷子轻轻停在其底部2mm处并迅速抽离。正是刷子的向下移动使你能连续地抓取组织，当开始的几毫米组织穿过刀片时便有自发卷曲的现象，这时，运动中的刷子立刻粘住其游离的边缘部分并水平地拖向切片者。刷子的运动路径是一个朝下的“肘”形，然后再朝向你自己，连续不断。但要注意有时候把组织压向台面时会使组织粘在台面上，可能会导致碎片，应尽量避免。当然预先将组织包埋起来可以使刷子不用接触到组织，切片也容易多了。

7.贴片

可以从切片机的台面上也可直接从组织块面粘贴组织片，我一般采用前者。片子切好后，手持玻片在片子上方，向下以一个角度粘住片子的一角，在静电作用下片子会吸附在玻片上并迅速融化。当然在周围涂一些包埋物对贴片有利，这种多余的包埋物可以保护片子的边缘免受皱缩的损坏。有时候碰到贴片困难，我会在切到最后2mm包埋物的时候停下来，让片子留在组织块上，然后倒转摇柄，使组织块退离刀片，再用刷子从边缘把组织片摊平，这样就可以从组织块面贴片了，这对卷曲的片子或者脂肪组织非常管用。

8.快速固定

我右手转动摇柄也同时拿着玻片，片子一切好，立刻粘起片子并将它浸没于固定液中。固定液需置于方便够到的地方，我一般将染色架放在染色缸的旁边，先将片子置于95%的乙醇溶液中固定，然后插于染色架上。如果组织固定延迟会出现风干的假象，我的经验是组织片还在切片机的台面时，风干效应很小，当组织片粘在有温度的玻片上时就会出现明显的风干假象，表现为核的细节丢失及胞浆液的溢出。下面几张图片是延迟15秒固定和立刻固定的相同组织的比较，差异非常明显。

9.切片的厚度

对于一般的手术病理我推荐切6um厚，这种厚度使染色更加饱满，层次清晰，病理学家通常在2x 和 4x的放大倍数下可以获得更多的信息。太薄的片子在这种放大倍数下显得苍白，容易忽略一些细节。6um的片子可以有更多的时间去避免风干假象，也会减少冰晶所造成的细胞核空洞。当然特殊情况下可能需要更厚或更薄的片子。 参考知识B 1、把冷冻好的组织承载器装到仪器的进退键上，手工旋转旋钮，观察是否固定好。. 2、调好切片厚度，修片，修到需要的位置再切，恒温冰冻切片机为较理想的冰冻切片机，切片机置于低温密闭室内，切片时不受外界温度和环境影响，可连续切薄片至5-20μm，一般切10um既可。. 3、切片时，低温室内温度以-15℃ ~ -22℃为宜，温度过低组织易破碎，抗卷板的位置及角度要适当，载玻片附贴组织切片，切勿上下移动。. 注意：包埋剂的选择，包埋剂是对冰冻切片的质粒是一个重要的影响因素，常规的包埋剂有OCT剂，B超耦合剂和普通的胶水；其中B超耦合剂适用于细胞丰富质地较嫩的组织，普通胶水和OCT剂适用于纤维丰富质地偏硬的组织。. 五、冰冻切片的注意事项 参考知识C 切片首先需要使用一些辅助的手套，外加就是一定要仔细一点，多练习，先从切一些简单的食物开始，类似于萝卜和一些瓜果类，然后逐渐的锻炼，久而久之就能很好的切片了，加油哦！ 参考知识D 冰冻病理切片是指冰冻组织取材后，经过冰冻切片机冰冻大概3-5分钟，冰冻切片机温度大约在-20℃，3-5分钟以后病理组织会被冻成较硬的实性组织，然后在冰冻切片机下进行切片，切片的厚度大约为5μm左右。冰冻切片机切好后，冰冻组织需进行染色，冰冻染色比常规染色方式更简单快速，由于制片时间较短，其会损耗平时切片染色过程中较好的组织结构形态，组织结构形态相对难辨认，细胞变形较多。经过染色后，即为冰冻切片最后步骤封片，封片和常规组织切片相同，需进行塑胶封片，封片后冰冻切片即可在显微镜下观察。