东西的纯度会影响消旋出峰吗

2023-01-08

本文主要是 东西的纯度会影响消旋出峰吗 相关的知识问答，如果你也了解，请帮忙补充。

色谱柱硅胶纯度
液相色谱柱所用硅胶填料的纯度对分离性能至关重要。金属离子杂质会导致峰拖尾和分辨率下降，如图所示（0.01%和0.005%的TFA）。
含金属离子杂质的硅胶需要采用高浓度离子对试剂（如TFA）维持良好的峰形。
微粒
通过与柱内填充微粒疏水表面的相互作用实现蛋白与多肽的分离。
柱内填充粒通常以硅胶为基础，这是因为硅胶的稳定性高，能够在大多数溶剂条件下（除了pH大于6.5的情况）保持稳定；此外，硅胶可以形成各种大小的具有不同直径的多孔球形颗粒。
硅胶纯度会影响多肽的峰形，尤其是加入的离子对试剂浓度较低时。高纯度硅胶所需离子对试剂的浓度远比低纯度硅胶低。

洗脱液：加入如图所示的TFA，以10%-55%的乙腈（ACN）梯度洗脱，洗脱时间为37.5分钟。
低浓度TFA会导致峰形较差且分辨率下降。硅胶纯度较高时（图B），0.005%的低浓度TFA会产生良好的峰形。
这在液相色谱-质谱联用法中尤其重要，因为在使用电喷雾接口时TFA会导致信号减弱。液相色谱-质谱联用法中低浓度的TFA会获得更好的检测信号。
孔径
通常，反相液相色谱法中小孔（~100埃）硅胶分离蛋白的效果较差。
大孔硅胶允许更大的多肽进入小孔，从而与疏水界面充分作用，因此zui终的峰形更好，分辨率更高。
由蛋白酶水解等产生的小分子肽能够进入小孔硅胶的孔隙内，从而与疏水界面相互作用；但是大孔硅胶也能较好地分离多肽，且具有不同的选择性和分辨率。
疏水界面
用碳氢化合物分子对硅胶进行改性，从而形成疏水界面。含烃链的氯硅烷，如十八烷基氯硅烷，与硅胶（表面有ji性硅烷醇基）反应使碳氢化合物附着在硅胶表面。
由于位阻效应，有机硅烷分子jin与硅胶表面部分硅烷醇基反应，因此大量的ji性硅烷醇基仍然会留在硅胶表面。
在“封端”过程中，较小的有机硅烷依次与ji性硅烷醇基反应，从而减少硅胶表面极性硅烷醇基的数量。选择分离表面。硅胶表面改性所用的化学过程允许多种有机基团附着在硅胶表面。
常见的改性是键合一条十八碳线性脂肪链，形成“C18”柱或ODS柱。C18柱尤用于分子量小于2~3000道尔顿多肽的分离，并且通常是分离由蛋白酶水解蛋白产生的多肽以及分离天ran和合成肽的选择柱。
由丁基键合至硅胶表面形成的疏水相较少，可用于分离大分子肽或疏水性肽。
其它用于多肽分离的柱包括苯基柱，其在疏水性方面与C4柱类似，是一种ji性嵌入或ji性封端柱，能够增强多肽与硅胶粒子表面的相互作用。因此，对多肽具有不同的选择性。 参考知识1 红外光谱基本都是对物质进行定性分析。可以对进行定量分析，下面是网上找的几种方法，希望对你有所帮助。红外光谱定量分析是借助于对比吸收峰强度来进行的，只要混合物中的各组分能有一个特征的，不受其他组分干扰的吸收峰存在即可。原则上液体、固体和气体样品都可应用红外光谱法作定量分析： 1.定量分析原理红外定量分析的原理和可见紫外光谱的定量分析一样，也是基于朗伯-比尔定律。该定律可写成：A=abc 上式中A为吸光度(absorbance)，也可称光密度(optical density)，它没有单位。系数a称作吸收系数(absorptivity)，也称作消光系数(extinction coeffieient)，是物质在单位浓度和单位厚度下的吸光度，不同物质有不同的吸收系数a值。且同一物质的不同谱带其a值也不相同，即a值是与被测物质及所选波数相关的一个系数。因此在测定或描述吸收系数时，一定要注意它的波数位置。当浓度c选用mol·L-1为单位，槽厚b以cm为单位时，则a值的单位为：L·cm-1·mol-1，称为摩尔吸收系数，并常用ε表示。吸收系数是物质具有的特定数值，文献中的数值理应可以通用。但是，由于所用仪器的精度和操作条件的不同，所得数值常有差别，因此在实际工作中，为保证分析的准确度，所用吸收系数还得借助纯物质重新测定。在定量分析中须注意下面两点： 1)吸光度和透过率是不同的两个概念、透过率和样品浓度没有正比关系，但吸光度与浓度成正比。 2)吸光度的另一可贵性使它具有加和性。若二元和多元混合物的各组分在某波数处都有吸收，则在该波数处的总吸光度等于各级分吸光度的算术和，但是样品在该波数处的总透过率并不等于各组分透过率的和。 2.定量分析方法的介绍红外光谱定量方法主要有测定谱带强度和测量谱带面积购两种。此外也有采用谱带的一阶导数和二阶导数的计算方法，这种方法能准确地测量重叠的谱带，甚至包括强峰斜坡上的肩峰。红外光谱定量分忻可以采用的方沦很多，下面我们介绍几种常用的测定方法。 (1)直接计算法这种方法适用于组分简单、特征吸收带不重叠、且浓度与吸收度呈线性关系的样品。从谱图上读取透过率数值，按A=lg(I0/I)(I0为入射光强度，I为透射光强度)的关系计算出A值，再按朗伯-比尔定律算出组分含量c，从而推算出质量分数。这一方法的前提是需用标准样品测得a值。分析精度要求不高时，可用文献报导的a值。 (2)工作曲线法这种方法适用于组分简单、特征吸收谱带重叠较少，而浓度与吸收度不完全呈线性关系的样品。将一系列浓度的标准样品的溶液，在同一吸收池内测出需要的谱带，计算出吸收度值作为纵坐标，再以浓度为横坐标，作出相应的工作曲线。由于是在同一吸收池内测量，故可获得A～c的实际变化曲线。由于工作曲线是从实际测定中获得的，它真实地反映了被侧组分的浓度与吸收度的关系。因此即使被测组分在样品中不服从Beer定律，只要浓度在所测的工作曲线范围内、也能得到比较准确的结果。同时，这种方法可以排除许多系统误差，同时在这种定量方法中，分析波数的选择同样是重要的，分析波数只能选在被测组分的特征吸收峰处。溶剂和其他组分在这里不应有吸收峰出现，否则将引起较大的误差。 3)解联立方程法解联立方程法运用的对象是组分众多而波带又彼此严重重叠的样品，通常无法选出较好的特征吸收谱带。采用这一方法的条件是必须具备各个组分的标准样品且各组分在溶液中是遵守Beer定律的。定量分析可以根据吸光度的加和特证来进行。例如某一混合物由n个组分所组成.各组分的浓度分别为c1，c2，c3,…，cn，它们在分析波数ν处的吸收系数各为av1，av2，…，avn，则样品在这个分析波数处的总吸光度为： Aν=A1v+A2v+...+Anv=av1bc1+av2bc2+...+avnbcn 样品中共有n个组分，每一组分都有一个以它为主要贡献的谱带和对应的波数值，可列出相应的方程组。如测出各个a值，则各个未知浓度c就可从联立方程式中解得。 a值的求法是将样品配成一定浓度后测出红外光谱，再求出某一波数处的吸光度值，由于c利b是已知的实验值，用Beer定律A=abc关系即可求得各a值。联立方程定量分析应注意以下几点： 1)选择合适的波数点。在此点波数只应以某—组分的贡献为主，其他组分在此都只有较小的吸收贡献， 2)读准吸光度。在实验时必须读谱图上那些没有吸收峰值的某波数上的吸光度数值。在谱带的斜坡上更需注意所读数据的准确性。 3)求a值时选取合适的浓度。在测定a值时。各组分的纯品配制浓度应接近未知样品中该组分的浓度，且应在该量附近配制4～5个点以求出较为可靠的a值，或据此绘出工作曲线。由于解联立方程的计算工作量很大，现代的红外光谱仪器均带有功能良好的计算机，借助所配备的计算机，运用线件代数中矩阵法解联立方程成为十分实用的方法。红外定量分析的准确度，若不考虑样品称量、溶液配制和槽厚在测定中所引起的误差。主要考虑吸光度的测定所引起的误差，±1%的误差是它的最佳极限值，实际上是比±1%大，因此红外光谱用得最多的还是定性分析。 参考知识B 旋光度可以判断液体有机化合物的纯度。
光用物理量很难判断样品的纯度，用各种光谱还行有可能，单用旋光够呛，很多东西都有旋光性，混合起来无法区分是谁的贡献。尤其是多种旋光物质精心复配，可以得到各种旋光值。
旋光法可用于各种光学活性物质的定量测定或纯度检验。将样品在指定的溶剂中配成一定浓度的溶液，由测得的旋光度算出比旋光度，与标准比较﹐或以不同浓度溶液制出标准曲线﹐求出含量。
条件
物体具有旋光性，其结构不能具有空间反演不变的性质。对于分子可以随机朝向的多晶或者溶液，分子必须具有手征性。由于有机分子本身的手征性导致的旋光性称为内旋光，内旋光分为左旋光和右旋光性，但如果一种物体内部同时具有左右旋光或物体分子本身结构具有相反的手性，则物体不表现旋光性。
由于物体内部同时具有左右旋光的分子而不表现旋光性称为外消旋性，而分子本身结构具有相反的手性而不表现旋光性称为内消旋性。
回答于 2021-12-21